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    了解DAB染色液是如何進行操作的?
    更新時間:2019-04-02   點擊次數:4493次
      DAB染色液也叫二氨基聯苯胺法,用于檢測細胞中過氧化物酶的活性部位。原理:細胞顆粒中的過氧化物酶,能將過氧化氫中的氧釋放出來,氧化二氨基聯苯胺(DAB),形成金黃色沉淀而定位于過氧化物酶活性的部位。
     
      DAB染色液的操作流程:
     
      1、烤片56-60度2h。
     
      2、二甲苯60度至少20min100%酒精5min90%酒精5min;80%酒精5min70%酒精5min蒸餾水5min。
     
      3、微波修復:將玻片加入枸櫞酸鈉緩沖液的燒杯內,微波加熱<中高火7min,停2min,再高溫2min,切不可高溫拿出,慢慢冷卻>。
     
      4、洗后,切片放入濕盒,滴加3%H2O2,常溫孵10min,PBS洗3*5min。
     
      5、用5%羊血清(PBS配),37℃,封閉30min。
     
      6、滴一抗(PBS+0.5%triton配),37℃孵2h或4℃過夜。
     
      7、第二天取出,PBS洗3*5min。加B液37℃,30min→洗3*5min。
     
      8、加C液37℃,30min,PBS洗3*5min。
     
      9、配制DAB顯色劑,切片上滴加DAB顯色液,鏡下控制顯色時間,1~10min,流水終止反應。
     
      10、蘇木素復染,約5-10min,鹽酸酒精分化約數秒,用自來水緩慢沖約20min,藍化。
     
      11、脫水10-20min<直接放在烘箱里烤干>,二甲苯透明10min。
     
      12、中性樹膠封片,烤片至黏稠。
     
      13、顯微鏡下觀察,拍照。

      DAB染色液的注意事項:
     
      1、顯色工作液應現用現配,新鮮配制的工作液應為無色或淺棕色,如顏色過深,請勿使用。
     
      2、DAB溶液應低溫密封保存。如有結晶析出,應確保結晶*溶解再行使用。
     
      3、DAB在常溫下不穩定,每次取用后均應及時加蓋密封放回冰箱,以免因DAB分解影響實驗,或因滲漏造成實驗環境污染。
     
      4、DAB有潛在致突變作用,操作時應注意穿戴好防護用具。

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